П. Вяткина - Полный медицинский справочник фельдшера
В автоматических анализаторах перемешивание может осуществляться непосредственно струей впрыскиваемого в кювету автоматическим дозатором реагента.
Оценка биожидкости для исследования Перед исследованием нужно оценить вид сыворотки и другие биожидкости.Гемолиз
Гемолизированная сыворотка и плазма непригодны для анализа многих компонентов (железа, ЛДГ, кислой фосфатазы, АсАТ, АлАТ, калия, магния, креатинина, билирубина, белковых фракций, осадочных проб и т. д.) в силу различных причин (более высокого содержания компонентов в эритроцитах и перехода веществ из них в сыворотку (плазму при гемолизе); химической или оптической интерференции гемоглобина в методах.
Видимый гемолиз распознается при пограничной концентрации гемоглобина 0,2 г/л. Уже при концентрации 1,0 г/л сыворотка плазма окрашивается в отчетливо красный цвет.
При наличии гемолиза в данной сыворотке исследование не проводится и запрашивается свежая биожидкость для анализа.Билирубинемия Интерферирует в методах, основанных на фотометрических измерениях в коротковолновой области спектра видимого света (300–500 нм). Однако путем постановки холостых проб на сыворотку или разведения пробы (креатинин, изменения порядка добавления реактивов, экстракции, снижающих влияние билирубина) удается получить приемлемые результаты.
Липемия При липемии происходит помутнение сыворотки или плазмы вследствие высокого содержания хиломикронов после приема пищи, богатой жирами. Отчетливая мутность возникает при концентрации триглицеридов более 4,5 ммоль/л. Степень и характер мутности, вплоть до сливкообразного характера сыворотки, зависят от состава и концентрации протеинов в ней. В некоторых случаях липемия может быть скорригирована постановкой специальных холостых проб. Следует запрашивать свежую биожидкость для исследования, взятую натощак.
Мутность материала
Мутность материала для исследования может быть обусловлена ростом бактерий, попавших в пробу, особенно при длительном транспорте и неправильном хранении. В этих случаях материал непригоден для анализа.
Помимо указанных, критериями неприемлемости биоматериала для анализа в лаборатории являются:
1) отсутствие номера на пробирках, перепутывание направлений на анализ;
2) несоответствие объема собранной крови количеству добавляемого антикоагулянта;
3) использование неправильных, интерферирующих в определении данного компонента антикоагулянтов, например использование фторида натрия при взятии крови, предназначенной для определения мочевины уреазным методом;
4) неправильная транспортировка биожидкости (например, без охлаждения или в незамороженном виде).Основные биохимические показатели крови
Лабораторная диагностика нарушений белкового обмена
Общий белок
Значение
В норме концентрация общего белка в сыворотке крови составляет 65–85 г/л.
Изменения концентрации общего белка могут иметь как абсолютный, так и относительный характер. Так, гипергидратация приводит к относительной гипопротеинемии, а обезвоживание – к относительной гиперпротеинемии.
Абсолютная гипопротеинемия развивается при:
1) недостаточном поступлении белков с пищей;
2) нарушении усвоения белков (снижение активности ферментов ЖКТ и др.);
3) понижении процессов биосинтеза белка (поражение паренхимы печени);
4) потере белка с мочой, кровью и др.
Абсолютная гиперпротеинемия (до 120 г/л и выше) встречается редко, наблюдается при миеломной болезни, макроглобулинемии, хронических воспалительных процессах.
Альбумин
Содержание альбумина в сыворотке крови является важнейшим показателем состояния белкового обмена.
В качестве унифицированного метода в клинической практике принят метод определения альбумина с красителями – бромкрезоловым зеленым и бромкрезоловым пурпурным.
Значение
В норме концентрация альбумина в крови 35–50 г/л.
Гиперальбуминемия встречается при избыточном введении альбумина, дегидратации организма.
Гипоальбуминемия имеет место при нарушении синтеза альбумина в печени, при недостатке белка в питании, недостаточном всасывании в кишечнике и потерях его в связи с поносами, при потерях белка через почки, через кожу, а также при повышенном катаболизме на почве тяжелого тиреотоксикоза, длительного приема гормонов и антиметаболитов.Белковые фракции
При изучении белкового спектра крови в качестве унифицированного метода используется электрофоретическое разделение белковых фракций на пленках из ацетата целлюлозы и в геле агарозы.
Под электрофорезом понимают движение заряженных частиц в постоянном электрическом поле. Белки сыворотки крови, обладая определенным зарядом, двигаются в электрическом поле к аноду или катоду в зависимости от знака заряда. В зависимости от величины молекулярной массы и величины заряда, белки при использовании в качестве поддерживающей среды пленки из ацетата целлюлозы либо агарозных гелей разделяются на 5 основных фракций: альбумины, альфа-1-, альфа-2-, бетаи гамма-глобулины.
При проведении электрофореза можно выделить 6 основных этапов:
1) подготовка среды для электрофореза;
2) помещение среды в камеру для электрофореза и обеспечение электрического контакта с буферными кюветами;
3) нанесение пробы;
4) проведение электрофореза в заданном режиме напряжения и силы тока;
5) фиксация и выявление полученных фракций с помощью красителей;
6) количественная оценка выявленных фракций.
У здоровых людей содержание альбуминов составляет 56,3-68,8 %, альфа-1-глобулинов 3–5,8 %, альфа-глобулинов 6,9-10,5 %, бета-глобулинов 7,3-12,5 %, гамма-глобулинов 12,8-19,2 %.
Содержание альфа-1-глобулинов увеличивается при острых и хронических воспалительных процессах, некоторых злокачественных опухолях.
Содержание этой фракции снижается при дефиците бетаантитрипсина, гипоальфа-1-липид емии, в несвежих порциях крови.
Содержание альфа-2-глобулинов возрастает при острых и хронических воспалительных процессах, нефротическом синдроме, злокачественных опухолях, гемолизе, в стадии восстановления после термических ожогов.
Уровень альфа-2-глобулинов может снижаться при сахарном диабете и панкреатите.
Содержание бета-глобулинов увеличивается при первичных и вторичных гиперлипопротеинемиях, особенно II типа, моноклональных гаммапатиях. Уровень бета-глобулинов снижается при гипобеталипопротеинемиях.
Гипергаммаглобулинемия наблюдается при хронических инфекционных и аутоиммунных заболеваниях, гепатитах, циррозах печени; снижение наблюдается при врожденной гипогаммаглобулинемии или агаммаглобулинемии.Коллоидно-осадочные пробы
Для изучения белкового обмена в КДЛ достаточно широко используются коллоидно-осадочные пробы.
Основными реакциями этого типа являются тимоловая и сулемовая пробы.
Тимоловая проба основана на помутнении смеси: при взаимодействии сыворотки с насыщенным раствором тимола в вероналоновом буфере. Определение степени мутности проводят фотометрически при длине волны 630–690 нм против рабочего реагента и выражают результат в единицах S-H.
В норме 0–4 ЕД S-H.
Более высокие цифры единиц помутнения могут косвенно указывать на диспротеинемию и характеризуют повышение содержания гамма-глобулинов.
Сулемовая проба основана на том, что сулема в присутствии мелкодисперсных растворов белков способна образовывать коллоидные растворы солей ртути. При нарушении дисперсности белковых фракций сыворотки крови происходит осаждение грубодисперсных частиц.
Результат выражают в количестве миллилитров сулемы, пошедшем на титрование.
Норма 1,6–2,2 мл сулемы. Как правило, сулемовая проба бывает положительной при токсических поражениях печени, циррозе, силикозе.
Лабораторная диагностика нарушений азотистого обменаЕсли белки сыворотки крови денатурировать растворами кислот (например, ТХУ, фосфорно-вольфрамовой или фосфорно-молибденовой) и удалить центрифугированием, то в растворимом центрифугате остается ряд низкомолекулярных азотсодержащих соединений. Эта группа соединений получила название фракции остаточного азота.
В состав фракции остаточного азота входят азот мочевины (46–60 %), азот аминокислот (25 %), креатина и креатинина (7,5 %), мочевой кислоты (4 %), индикана, аммиака (0,5 %) и др.Мочевина
Главной составной частью фракции остаточного азота является мочевина. Поэтому величина общего остаточного азота обычно пропорциональна величине мочевины, и для диагностических целей, как правило, исследуют содержание мочевины.
В качестве унифицированных утверждены диацетилмонооксимный метод и уреазный метод.
У здорового человека содержание мочевины в крови колеблется в пределах 2,5–8,33 ммоль/л. У лиц старше 60 лет уровень мочевины может слегка превышать норму.
